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【精华版】为什么做PSF测试?多久进行一次?具体怎么操作

2021/3/22


Argolight荧光显微镜标准测试片上的渐进线对

没错,Argolight标准测试片上的渐进线对就是用来测试显微镜分辨率的标准图样。有了它,分辨率的事儿似乎变得更容易判断了:仅凭肉眼都能看出来,哪一对儿线对看上去有间距,哪一对儿线对看上去妥妥的挤在了一起。这一过程甚至都不需要配套的Daybook定量分析软件的协助了。可是,确实有很多用户难以割舍点扩散函数(PSF)测试。一方面,PSF测试能够提供的不仅仅是分辨率的数值,另一方面,习惯成自然,PSF测试早已成为一项常规项目。于是,Argolight干脆接地气地将PSF测试功能加入了Daybook软件!新功能推出之际, Argolight寻找了几家重要生物成像中心的显微镜专家并就PSF测试这一话题,采访了他们的应用心得。您会发现他们进行这项测试的目的、频率其实不尽相同。或许,他们的想法也会给您一些启发吧。

Damien Schapman

法国鲁昂大学 诺曼底细胞成像平台PRIMACEN的工程师和显微镜专家

“我应用PSF测试来进行两项工作:

▶判断物镜的质量,并将它当下的情况与之前使用情况进行比对

作为第二个,甚至第三个视角来评估激光光源所处的光路的情况

我从来都不仅仅只做PSF测试。它一直是作为另一项测试或诊断方案的补充。

通过半峰全宽得出的分辨率结果很重要,但我不仅仅仰仗它来评估显微镜/物镜的状态。

我承认,当系统表现正常,其他的诊断方案没有引起我担忧的时候,我就不会花时间去做PSF测试。这主要是因为这项测试很耗费时间。”

Dr. Steffen Dietzel

德国慕尼黑大学 生物医学中心 生物成像核心设施的负责人

“我记录PSF是为了

测量分辨率

检查显微镜在长时间内的性能

理想状态下,我们希望能定期地每周或者每两周,对每一台系统的每一个物镜都进行一次PSF测试和其他测试。这就像是对电脑进行数据备份需要达到一定的频率,其实真正的问题在于:如果显微系统发生了一个问题,失去几周的工作数据,对你来说是可接受的呢?

比这些PSF测试结果的数值本身对我们更为重要的,是长时间内这些值的稳定性。

PSF测试无法反映所有存在的问题,但它已经可以反映不少问题了。”

Dr. Aurélien Dauphin

法国巴黎细胞和组织成像机构的生物学家、显微镜学家和生物图像分析员

“我多数的测试都是针对高倍率的物镜(40X及以上),每4-6个月进行一次。

我进行这项测试是为了三个目的:

了解实际的分辨率

了解球差和物镜的瑕疵

获得一个PSF结果以便用于反卷积算法

一段时间之后,镜油可能进入物镜内部,造成一些成像问题。这时PSF测试就很有用。

相比于其他的一些质量控制测试,我们进行PSF测试的频率是比较低的,因为我们的经验是,PSF测试结果的起伏比照明均匀度或者激光功率的起伏小。”

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